一、器 材
剪刀(剪兔毛用)一把，弯头眼科手术镊子(游离血管用)一把，直头眼科手术剪(剪血管用)一把，手术刀架，手术刀片，注射器(1 mL、10 mL、25 mL)附针头，兔子固定架，灭菌三角烧瓶(200 mL)或平皿(直径 18 cm)，弯头止血钳四把，直头止血钳两把，手术缝合线，塑料放血管，纱布，离心机，塑料离心管，加样器及加样管，烧杯。
二、试 剂
生理盐水(或 PBS)，弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant, FCA) Sigma F-5881，弗氏不完全佐剂(Freund’s incomplete adjuvant, FIA) Sigma F-5506，二甲苯，酒精棉，脱脂棉，2% NaN3，莱普卡因局麻药。
三、实验步骤
1、选兔：选择体重4斤以上健康雄性兔，两耳光滑，明显可见耳静、动脉。
2、预放血：待兔子在新环境中稳定适应4天左右时间，耳动脉取血 5 mL。轻轻的将兔子放在特制兔盒中，处于放松状态的兔子采血会较容易。按压兔子耳根部直至血管突出,然后将针头插入耳部血管的中上部，观察到进针后小心推出活塞收集血液 1-5 mL。结束收集后，退出针头并按压伤处以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒温箱中放置30分钟以防止激活补体系统，再将试管在2-8°C放置过夜使血液凝固。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，2-8°C，10,000g 离心10分钟，收集上清液在2-8°C保存。
3、准备抗原：将纯化好的抗原液与佐剂等比例混合，剧烈振荡使其充分乳化。振荡后，1000rpm 离心1分钟，如水相和油相不分层即可注射。首次免疫用 FCA，以后都用 FIA。
4、从笼中取出兔子放在平坦处，在4个不同的部位进行皮下注射，两处在后背，两处在大腿处。抚去注射处的兔毛并用乙醇消毒暴露的皮肤。捏出皮肤，将针头以相对皮肤15度的角度进针，进针深度为1-2 cm，小心不要刺入肌肉中，在 4 个不同部位分别各注射约500 µL 抗原溶液。注射结束后，将针在注射处放置几秒钟后再轻轻拔出，并用乙醇在注射处消毒。在4个部位重复上述操作，间隔2周后再于上述部位选不同点注射。每次免疫的抗原量约100 μg。免疫次数在4-5次，抗原用量大可以减少次数。
5、每4-6周注射抗原，并在注射后的7-10天按照步骤2收集血液。将收集的血液与注射前收集的血液进行比较，检查是否有抗体产生。待确定产生抗体后可大量收集血液。因为起初几次免疫产生的抗体的效价比较低，取血量够检测用即可。
6、在三次免疫后，可以获得较高效价的抗体，每次取血量可以在40 mL，要注意过量采血会造成兔子贫血。最后一次取血可以采用颈动脉放血，具体操作如下：
a. 家兔仰卧于兔架上固定头部，用纱布固定四肢。头部略放低以暴露颈部。剃毛并消毒皮肤；
b. 沿颈部中线用手术刀切开皮肤约10 cm，分离皮下结缔组织，直至暴露出气管两侧的胸锁乳突肌(小心操作，如碰到小血管出血，可用止血钳止血)
c. 用直头止血钳分离胸锁乳突肌与气管间的颈三角区疏松组织，暴露出颈总动脉后用弯头眼科镊使之游离，剥离神经和结缔组织；
d. 于动脉下套入两根黑丝线，分别置于远心及近心端。结扎远心端的丝线。近心端的动脉用血管夹夹住；
e. 用小拇指垫在血管下，用尖头眼科手术剪在两根丝线间的动脉璧上剪一小口(勿剪断)，插入塑料放血管。再将近心端的丝线结扎固定于放血管上，以防放血管滑脱；
f. 松开止血钳，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120 mL。
7、将血液在37°C恒温箱中放置30分钟，再在2-8°C放置过夜。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，2-8°C，10,000g 离心10分钟，收集上清液即为抗血清。
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